培养皿的制作??
一、微生物培养皿的制作:
分离培养微生物,离不开固体培养基。在微生物实验室里,固体培养基的使用是如此地频繁和常规,以至于这一方法看起来也理所当然。然而,回溯至1881年固体培养基出现以前,微生物的培养还只能在液体培养基中进行。为了能直接观察培养物的形态及生长情况,科学家希望能将微生物培养在固体表面上,就像微生物生长在橘子皮或土豆上一样。德国医生罗伯特·科赫(Robert·Koch,1843—1910)曾用煮沸消毒的土豆来培养细菌。此后,他试着用明胶作培养基的凝固剂。他将明胶加入液体培养基中进行融化,然后将混合均匀的液体缓慢地倒在一块玻璃板的表面。当明胶冷却凝固后,就在玻璃板表面形成一层固体培养基。为了防止空气中杂菌的污染,科赫还用玻璃罩将玻璃板与周围环境隔离开来。但是,人们很快发现,明胶在20 ℃以上就变软了,很难进行分离微生物的划线操作。在温度高于25 ℃时,明胶就液化了,而大多数细菌的培养温度都不低于25 ℃。
二、培养皿的定义:
培养皿是一种用于微生物或细胞培养的实验室器皿,由一个平面圆盘状的底和一个盖组成,一般用玻璃或塑料制成。培养皿材质基本上分为两类,主要为塑料和玻璃的,玻璃的可以用于植物材料、微生物培养和动物细胞的贴壁培养也可能用到。塑料的可能是聚乙烯材料的,有一次性的和多次使用的,适合实验室接种、划线、分离细菌的操作,可以用于植物材料的培养。
细胞悬浮培养技术
植物细胞悬浮培养 实验方法
1.用镊子夹取出生长旺盛的松软愈伤组织,放入三角瓶中并轻轻夹碎。每100ml三角瓶含灭过菌MS培养基10~15ml,每瓶接种1~1.5g愈伤组织,以保证最初培养物中有足够量的细胞。
2.将已接种的三角置于旋转式摇床上。在100r/min,25~28℃条件下,进行振荡培养。
3.经6~10天培养后,若细胞明显增殖,可向培养瓶中加新鲜培养基10ml,必要时,可用大口移液管将培养物分装成两瓶,继续培养。(若细胞无明显增殖,可能是起始材料不适当,应考虑用旺盛增殖期的愈伤组织重新接种)。可进行第一次继代培养。
4.县浮培养物的过滤:按“3”法继代培养几代后,培养液中应主要由单细胞和小细胞团(不多于20个细胞)组成。若仍含有效大的细胞团,可用适当孔径的金属网筛过滤,再将过滤后的县浮细胞继续培养。
5.细胞计算。取一定体积的细胞县液,加入2倍体积的8%的三氧化铬(CrO3),置700C水浴处理15min。冷却后,用移液管重复吹打细胞悬液,以使细胞充分分散,混匀后,取一滴县液置入血细胞计数板上计数。
6.制作细胞生长曲线:为了解县浮培养细胞的生长动态,可用以下方法绘制生长曲线图:
(1)鲜重法(fresh weigh method)
在转代培养的不同时间,取一定体积的悬浮细胞培养物,离心收集后,称量细胞的鲜重,以鲜重为纵座标,培养时间为横座标,绘制鲜重增长曲线。
(2)干重法(dry weigh method )
可在称量鲜重之后,将细胞进行曲烘干,再称量干重。以干重为纵坐标,培养时间为横坐标,绘制细胞干重生长曲线。
上述两种方法均需每隔2天取样一次,共取7次,每个样品重复三次,整个实验进行期间不再往培养瓶中换入新鲜培养液。
7.细胞活力的检查。对于初学者,往往需要检测活细胞的比率。可在培养的不同阶段,吸取一滴细胞县液,放在载玻片上,滴一滴0。1%的酚藏花红溶液(用培养基配制)染色,在显微镜下观察。几活细胞均不着色,而死细胞则很快被染成红色。也可用0。1%荧光双醋酸酯溶液染色,凡活细胞将在紫外光诱发下显示蓝绝色荧光,有经验的操作者,则可根据细胞形态,胞质环流判别细胞的死活。
8.细胞再生能力的鉴定:为了解悬浮培养细胞是否仍具有再生能力,可将培养细胞转移到琼脂固化的培养基上,使基再形成愈伤组织,进而在分化培养基上,诱导植株的分化。
细胞悬浮培养念?
细胞在培养液中呈悬浮状态生长与增殖的培养技术。是一种通过振荡或转动装置使细胞始终处于分散悬浮于培养液内的培养方法。非贴壁依赖性细胞的一种培养方式。
植物细胞的悬浮培养是指将植物细胞或较小的细胞团悬浮在液体培养基中进行培养,在培养过程中能够保持良好的分散状态。这些小的细胞聚合体通常来自植物的愈伤组织。