影响bca蛋白浓度测定因素
BCA方法是一种用于测定蛋白质浓度的方法，基于其与copper（Ⅱ）离子的化学反应形成物质的吸光度。以下是可能影响BCA测定蛋白质浓度的因素： 1. 样品的干扰：如果样品清洁不够或者存在其他杂质，可能会干扰化学反应，导致测定结果不准确。 2. pH值：根据BCA法原理，将copper（Ⅱ）离子还原为copper（Ⅰ）离子需要正确的pH值。同时，样品的pH值也会影响反应的效率。 3. 还原剂浓度：还原剂的浓度过高或过低都可能影响反应的效果。一般情况下，还原剂的浓度应在合适的范围内。 4. 离心：在添加还原剂之后，样品需要进行离心，以使沉淀沉淀到底部。如果离心时间过短或者转速过低，可能会影响分析结果。 5. 读数时机：对于BCA法来说，在确定反应完成之后读数非常重要。如果没有在正确的时间读取吸光度，可能会导致结果偏差。 6. 其他因素：其他因素可能包括不同供应商提供的试剂和试管的批次变化、温度等。
BCA法测定蛋白浓度结果偏大原因?
bca法测蛋白浓度超过量程肯定不准确的超过量程一般就是是超过了标准曲线的最高点。 双缩脲法是第一个用比色法测定蛋白质浓度的方法，硫铵不干扰显色， Cu2+与蛋白质的肽键，以及酪氨酸残基络合，形成紫蓝色络合物，此物在540nm波长处有最大吸收。双缩脲法常用于0.5g/L～10g/L含量的蛋白质溶液测定。 扩展资料： 注意事项： 反应颜色的深浅除了与样品的蛋白质浓度相关外，还与反应的温度有关。如果样品的浓度较高（>50μg/ml），反应温度一般采用37 度。如果样品蛋白质的浓度较低（<50μg），反应的温度为60℃，该温度下，色氨酸、酪氨酸和肽键得到充分氧化，大大提高检测灵敏度。 该方法检测的蛋白质浓度范围20μg-500μg/ml；当蛋白浓度＜20ug/ml 时，推荐60℃温浴，并将蛋白液：工作液的比例调至1：8 进行测定（增强法）可以检测到5ug/ml。 参考资料来源：百度百科-BCA蛋白浓度检测